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  • Foto del escritorClaudio Vilariño

Guía OCDE 429: sensibilización dérmica


Directrices de la OCDE para el ensayo de sustancias químicas

Las Directrices de la OCDE para las pruebas de sustancias químicas son una colección de aproximadamente 150 de los métodos de prueba acordados internacionalmente más relevantes utilizados por los gobiernos, la industria y laboratorios independientes para identificar y caracterizar los peligros potenciales de las sustancias químicas. Son un conjunto de herramientas que se utilizan principalmente en las pruebas de seguridad reglamentarias para la evaluación y registro de productos químicos. También se pueden utilizar para la selección y clasificación de sustancias químicas candidatas durante el desarrollo de nuevas sustancias químicas y productos y en la investigación de toxicología. Este grupo de pruebas cubre los efectos sobre la salud.


En esta entrega al respecto de las Directrices OCDE relacionadas con Métodos Alternativos y con el bienestar animal enumeramos y describimos las siguientes:


Pruebas No. 429 (LLNA), 429 A (LLNA:DA) y 429B (LLNA BrdU ELISA): Sensibilización dérmica

El principio básico que subyace al ensayo de ganglios linfáticos locales (LLNA) en ratón es que los sensibilizadores inducen una proliferación primaria de linfocitos en los ganglios linfáticos auriculares que drenan el sitio de aplicación del producto químico. Esta proliferación es proporcional a la dosis aplicada y provee una medida de sensibilización. El ensayo proporciona información cuantitativa sobre el potencial sensibilizador expresado como un valor EC3 (es decir, la concentración de la sustancia química requerida para inducir un aumento de 3 veces en la proliferación de células de los ganglios linfáticos), lo que permite también la evaluación dependiente de la dosis.


El método 429 (LLNA) se basa en el uso de marcaje radiactivo para medir la proliferación celular, mientras que el 429A (LLNA:DA) y el 429B (LLNA BrdU ELISA) son versiones no radioactivas.

En el LLNA, la timidina o el yodo radioisotópicos se utilizan para medir la proliferación de linfocitos y, por lo tanto, el ensayo tiene un uso limitado en regiones donde la adquisición, el uso o la eliminación de radiactividad no son problemáticos, en la práctica la marcación con radioactivo ya está casi en completo desuso.


El LLNA:DA es una modificación no radiactiva del LLNA, que cuantifica el contenido de trifosfato de adenosina (ATP) mediante bioluminiscencia como indicador de la proliferación de linfocitos.

El LLNA:BrdU-ELISA [ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas] y en otra versión tecnlógica, el LLNA: BrdU-FCM [método de citometría de flujo] son modificaciones no radiactivas del método de prueba LLNA, que utiliza 5-bromo-2-desoxiuridina no radiomarcada (BrdU) en un sistema de prueba basado en ELISA o FCM para medir la proliferación de linfocitos.


El LLNA (TG 429) y las dos modificaciones no radiactivas, LLNA: DA (TG 442 A) y LLNA: BrdU-ELISA (TG 442 B), proporcionan una ventaja sobre la prueba con cobayas descripta en TG 406 en términos de reducción y refinamiento del uso de animales.


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